利用EST和生物信息学及细胞分子生物学技术研究某基因的功能,试设计技术路线

首先,EST序列的测序,得到该基因的EST片段
其次,生物信息学,用Go或者KEGG,分析该基因的功能分类,所在代谢途径等；通过NCBI Blastn,BlastX,tBlastn等比对与该基因同源性较高的基因序列和可能功能；通过ExPASY研究蛋白的特点,二级结构,三级结构等.
之后,根据已得到的信息,依据可能的功能设计细胞分子生物学实验,
例如,1利用已知序列,通过RACE方法获得该基因的cDNA全序列,通过巢式PCR或者Tail PCR的方法获得全基因组序列及promotor序列
2构建过表达载体,在生物体内过表达该基因,看是否获得可见表性
3构建反义RNA载体,或者RNAi载体,使该基因的表达沉默,看是否获得可见表性
4通过同源重组的方法,敲除该基因,看是否获得可见表性
5在该基因缺失的突变生物体中,过表达该基因,看表性能够得到互补t突变
6在该基因启动子后接上报告基因,观察该基因的表达位置
7在将该基因与报告基因后,进行亚细胞定位
8采用real-time-PCR的方法,观察该基因的表达模式
9采用基因芯片的方法,观察与该基因有关的基因
10采用酵母双杂交的方法,寻找与该基因相互作用的蛋白.
等等等等

先利用EST在网上找出你要研究的那个物种的DNA片段，看看在别的物种中它具有啥功能，根据保守性在你所研究的物种中应该也差不多。把你的基因正义和反义片段分别导入你所研究的物种中，看看对它用啥影响就行啦。你要是没有这个基因的全长那就麻烦了。...