酶切后PCR一条带都没有 但原质粒PCR有条带 为什么

酶切后PCR一条带都没有 但原质粒PCR有条带 为什么
做MUCIN基因 从扩增、 切胶纯化、 加A 、T载体链接、 转入感受态 到挑克隆鉴定出阳性克隆 最后提质粒 取一部分提出的质粒双酶切 质粒与酶切产物同时跑电泳鉴定 原质粒有条带 可是酶切一条也没有 为什么
赚錢买花戴 1年前 已收到4个回答 举报
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赛普拉 幼苗

共回答了20个问题采纳率：95% 举报

什么酶呢?最后酶切组的电泳条带是弥散,是只有质粒条带没有酶切产物条带,还是干脆就是空白?
如果是弥散,最有可能的是所用的酶的反应条件要求比较严格,因为掌握不当而产生了星号活性,导致把质粒切碎了.建议查一下所用酶的酶切条件.
如果是有质粒条带而没有短片段条带,也就是说没切开了.可能酶切位点发生了突变,也可能是酶失活了.
如果是空白...我也不知道怎么回事儿了...再重复一次吧.
如果认为之前的步骤都没什么问题,不如直接送测序.比酶切检验还要精确呢.
祝实验顺利.

1年前

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飘雪无涯 幼苗

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提取的质粒浓度太低也说不定，碱抽时最后一步加的TE量是不是太多呢？！
或者你的酶已经被污染了，因为非特异性酶切的产生，导致所得到的片段都很小，在电泳结束时已经跑出了胶。这种情况下可以短时间跑胶看看结果，不过感觉可能性不大。。...

1年前

2

kimheeseon1 幼苗

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控制消化时间，先单酶切看看。还有，你那个质粒的条带亮不亮？如果比较模糊，由于浓度太低，就可能出现酶切后什么都没了的情况。

1年前

1

喜罗 幼苗

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降解了。

1年前

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