这种情况怎么判断酶切成功?最近我试验遇到了一个问题,我需要提出一个22kb左右的大质粒,进行BamHI大量酶切,但是昨天

对于大的质粒,用电泳速度去判断基本很难,除非去做脉冲电泳.你看看MARKER的条带和速度就知道了,在100、200时,电泳一会儿就分得很开,而8K、10K想分开就要,要的时间比较长,而象DL15000,后面的条带是10K和15K,就算这样还只能会开一点点.
并且核酸电泳速度还与本身浓度,盐离子浓度有关,所以大片段普通电泳基本没法判断大小.如果你有λDNA,可以一起跑着试一下,那个更大,但电泳速度与你的23K也不会差太多.
如果只是单纯的判断是否酶切开了,可以做一下转化.
用切过的和没切过的一起去转化感受态.看看他们长出多少斑来.理论上,如果酶切完全,不应该长出斑来的.

环状质粒的拓扑结构并不固定，一般来说环状质粒电泳速度要比线性的快，但其移动速度并不是一定的，所以有可能出现你遇到的情况。
其实，要验证酶切是否有效很简单，只需实验时再加一个对照，用BamHI和另外一个已知位点的限制性内切酶进行双酶切，电泳查看DNA条带是否和预测的条带相符即可（双酶切至少会生成两个以上的DNA条带，所以便于检验）。...

质粒是环形的，你单酶切只能从环状变成直链。
至于位置的差异可能是形状的不同。环状的和直链的大小差不多，但是三维构型不同，和胶的摩擦力肯定也有差异，但是这个差异很小。这就是为什么你位置大概相同，只相差一点点的原因...
当然也有可能是你试剂不行，条件不理想...但是我觉得最有可能的就是单酶切只能切成直链，不能切成两段。是啊，质粒是环状的，我单酶切后就会成线性，跑胶后应该明显滞后于环状...