PCR的问题pcr结果得不到想要的片段,我是使用四个片段合成一个,结果产物全部都小,再用产物做pcr得到的片段是其中最小

你可以做一个梯度PCR,用高保真酶.如果还是没有扩出来的,那可能就是你的药品问题了,buffer啊,dNTP啊,酶啊有问题、
多试几次,相信会成功的
另外有些步骤你参考下,看是不是控制条件上有点问题
1.反应体系与反应条件
　　标准的PCR反应体系：
　　10×扩增缓冲液10ul
　　4种dNTP混合物各200umol/L
　　引物各10～100pmol
　　模板DNA0.1～2ug
　　TaqDNA聚合酶2.5u
　　Mg2+1.5mmol/L
　　加双或三蒸水至100ul
　　PCR反应五要素：参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和缓冲液（其中需要Mg2+)
2.工作步骤
　　

PCR反应的基本过程
标准的PCR过程分为三步（：
　　1.DNA变性（90℃-96℃）：双链DNA模板在热作用下,
　　氢键断裂,形成单链DNA
　　2.退火（复性）（40℃-65℃）：系统温度降低,引物与
　　DNA模板结合,形成局部双链.
　　3.延伸（68℃-75℃）：在Taq酶（在72℃左右最佳的活
　　性）的作用下,以dNTP为原料,从引物的5′端→3′ 端延
　　伸,合成与模板互补的DNA链.
　　每一循环经过变性、退火和延伸,DNA含量既增加一倍.
　　现在有些PCR因为扩增区很短,即使Taq酶活性不是最佳也能在很短的时间内复制完成,因此可以改为两步法,即退火和延伸同时在60℃-65℃间进行,以减少一次升降温过程,提高了反应速度.