设计用大肠杆菌分泌表达或者融合表达猪的一个蛋白的方案?写程序!

设计用大肠杆菌分泌表达或者融合表达猪的一个蛋白的方案?写程序!
需要确切的分泌表达或者融合表达的步骤啊
liegou2008 1年前 已收到1个回答 举报

neverland7 幼苗

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首先得到猪蛋白的基因(提取或者合成),然后将这段基因连接到克隆质粒上,筛选阳性克隆,测序正确后,再将这段基因连接到表达载体上(分泌表达或者融合表达载体),测序、酶切验证以后,就可以表达了
表达步骤:挑取阳性单菌落接种于5ml 含抗生素的LB培养液中,37℃振荡培养过夜,后按照1:100接种于多个100 mL同样的LB培养液中,于37℃振荡培养.当菌液OD 600达到0.5- 0.6 时,加 IPTG 至终浓度为 0.1mM,37℃诱导培养4 h.IPTG 浓度、温度和诱导时间等都需要优化.如果是分泌表达,离心后取上清电泳,如果是融合表达,一般会形成包涵体沉淀,需离心后超声破碎再电泳

1年前

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