[求助] PCR产物条带很淡最近做的PCR一直条带很淡,已经调了一些条件,还是没有效果. 目前是这样的:目的片段大约2.

[求助] PCR产物条带很淡
最近做的PCR一直条带很淡,已经调了一些条件,还是没有效果.
目前是这样的:目的片段大约2.5kb,退火温度55度,从电泳的结果看来目的条带很整齐,也没有非特异性扩增,就是非常淡,我没有办法回收,而且存在引物二聚体(这是我的引物无法避免的).退火温度调低1度就会出现非特异性扩增,调高一度条带就会消失.请教一下各位,条带很淡的原因?有什么改进的办法吗?谢谢!
liumuxian 1年前 已收到3个回答 举报

ARM微控制器 幼苗

共回答了16个问题采纳率:100% 举报

加多几个循环,或者换好一点的Taq酶

1年前

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30岁前退休 幼苗

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是做克隆吗???可以取第一次的产物4,5ul作为模板,进行第二次PCR,你应该会得到足够的量。。

1年前

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13916051803 幼苗

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调整模板量,模板量太多或者太少均得不到很亮的条带。 4 增加循环数!增加模板量 RT-PCR一般是用来检测基因的表达情况,产物量少应该是说明该

1年前

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